自2020年10月上海快靈發布“非洲豬瘟高敏PCR試文雨劑盒”（下稱高敏試劑盒）以來，其出色的靈敏度、敏感性、特異村爸性及穩定性迅速被廣大(dà)豬場實驗室認可年國。随着熒光PCR相關技術的普及以及用戶群體的增大(dà刀物)，部分之前未被重視的問題也逐漸顯露出來。本篇我們(me劇鐘n)探讨下各廠家(jiā)都諱莫如(rú)深的一個點兵林——“假陽”問題，以及相應的解決方案。

“假陽”問題，事實上在熒光PCR領域并不(bù)少見，店坐而造成假陽産生的原因也是紛繁複雜：如(rú)操作不(bù)當污染、環境氣溶學友膠污染或者試劑生産過程污染等。本文所要探就女讨的“假陽”，主要指因試劑特異性導緻的假陽，換句話說(shuō他作)，即文中所提的“假陽”，與操作者、儀器(qì媽相)、環境均無關，隻與試劑盒内的試劑有關。那麼試劑盒中到底什麼與“假陽坐山”相關呢？縱觀商業化的非瘟病毒PCR檢測試劑盒，其中都會(huì)提理風及一個重要參數——特異性。

何為(wèi)特異性呢？在PCR擴增過程中，如(rú)果我們(m理上en)要擴增的非洲豬瘟DNA片段在整條DNA鍊志這上不(bù)止出現了一次，或者樣品中混有的其他(tā)物種、細火讀胞或病毒的DNA中含有類似的DNA片段，則懂我可能會(huì)将其他(tā)片段擴增出來，那最後儀店說器(qì)顯示出來的陽性結果就不(bù)一定是非瘟病毒船身DNA造成的，于是陽性結果也就變成了假陽。因此，通(tōng)俗來說(sh市可uō)，特異性反應的是試劑盒能擴增出特定DNA片段的性能，特異性越低(dī女少)，則試劑盒擴增其他(tā)片段的概率就越大(dà)，即“假陽”幾率火現更大(dà)。
   市售的衆多非瘟病毒PCR檢測試劑盒中，絕大(dà)多數廠商在宣傳其試劑盒特異習吧性時(shí)均會(huì)标注＞99%，最低一我(dī)也不(bù)會(huì)低(dī)于98%，快靈那愛的高敏試劑盒也是如(rú)此，特異性可達到吧著99.9%，屬實是已經做到了極限，即使PCR技術發展至今，因為(wèi喝下)模闆DNA的不(bù)确定，依然無法保證10窗現0%的特異性。也正因此，特異性，也就是假陽的問題是被區就大(dà)家(jiā)忽視了。

在服務客戶的過程中，我們(men)發現很多客戶在進行非會票瘟病毒檢測遇到極弱樣本或疑似樣本時(shí)，對于陽性場，往往喝影遵循的是“甯殺錯(cuò)，不(bù)放過”，而對于陰性場，往往帶來心理的恐慌，需要确認到底是不(bù)是陽性見吃。的确，随着非瘟一波波的襲來，各檢測單位的工(gōng)作量都史無前例的倍弟在增，再重新來一遍的全面複核，顯然是對人力和成本科得的巨大(dà)考驗。面對這樣的大(dà)環境，快靈人陷入了沉思。

“我們(men)為(wèi)什麼要甯殺錯(cuò)？”

“當真沒有辦法消除假陽麼？”

帶着這樣的問題，我們(men)開(kāi)始了新的一輪又一輪的嘗試：提升試她都劑盒的靈敏度、将特異性由99%提升至99.9物西%……或許，我們(men)可以把眼界放寬，不(bù)局限于單純的擴增？

于是，高敏試劑盒上市半年後，我們(men)在高敏試劑盒基礎低年之上研發出其“升級版”——快靈高敏試劑盒（熔解确認版）票東。

快靈高敏試劑盒（熔解确認版），其性能參數與高敏試劑盒一緻，我們(me嗎木n)同樣保證其靈敏度、敏感性、穩定性、特異性處在行業男路頂尖水平，确保客戶可以第一時(shí)間檢測出陽性樣本。包括其操作、也時擴增階段也與高敏試劑盒别無二緻，至此，我們分視(men)可以把快靈高敏試劑盒（熔解确認版）等同于都資高敏試劑盒。詳見表1：

表1：高敏試劑盒與假陽确認試劑盒基本性能參數對比

但，重點來了！快靈是怎麼做到的？快靈高敏試劑盒（熔解确認花答版）突破性地使用了一個新的反應程序——熔解曲線。熔解曲線能鑒别不(bù)同信一的DNA片段，依靠的不(bù)是Ct.值，而是其特有的熔解峰，即Tm值，司是即使一個DNA片段中僅相差一個堿基，都能導緻Tm值變動。依靠Tm值的拿身判定就可以确認之前擴增陽性的非瘟樣本是否為(wèi)真的非瘟陽性兵事，以此達到鑒别假陽，消除客戶疑慮的目的。

   &nb小愛sp;  

圖1：擴增曲線Ct.值判讀陰陽 多機;    &nb放她sp;  圖2：熔解曲線檢測疑似/弱陽樣本，排除假陽

非瘟新形勢下，除了要求試劑盒更早的檢測出陽性，更需要真正“精準小雨”檢測。快靈高敏試劑盒（熔解确認版）除了超高的靈敏度、特異性，更是“自東習帶”熔解曲線，讓假陽無處可藏，讓弱陽“站得(家內de)住腳”，真正做到打消客戶疑慮，真正做到“不(bù)殺錯(cuò理風)、不(bù)放過”。